走进尊龙凯时
NEWSBsaI与尊龙凯时GMP级内切酶的应用
来源:周绿园 日期:2025-03-28尊龙凯时对活性单位(U)的定义为在50μl反应体系中,37℃条件下1小时内所需的酶量以完全切割1µg的pPIC9K(Dcm-)。酶的蛋白纯度经过SDS-PAGE电泳检测确认,确保纯度不低于95%。
在37℃下,采用50μl的CutBuffer F和GMP Grade反应体系,将20U的BsaI(GMP Grade)与1µg的pPIC9K(Dcm-)共培养1小时,结果显示未检测到其他核酸酶污染或由于大肠杆菌衍生的星号活性导致的底物非特异性降解。延长酶切时间可能会引发星号活性。
在37℃条件下,使用50μl的CutBuffer F和GMP Grade反应体系,将20U的BsaI(GMP Grade)与1µg超螺旋质粒DNA共培养4小时。经过琼脂糖凝胶电泳检测,发现少于20%的质粒DNA转变为缺刻或线性状态,表明非特异性内切酶活性极低。
此外,在37℃下的20μl CutBuffer F和GMP Grade反应体系中,将20U的BsaI(GMP Grade)与15ng的双链DNA片段共同孵育16小时后,琼脂糖凝胶电泳检测表明双链DNA片段保持不变,没有任何降解现象。
在同样的37℃条件下,将20U的BsaI(GMP Grade)与500ng的RNA在10μl的CutBuffer F和GMP Grade反应体系中孵育1小时后,检测结果显示不低于90%的RNA仍然保持完整。这充分验证了尊龙凯时产品的高特异性和低污染风险。
对于核酸酶Eco31I、Bso31I和BspTNI的识别位点为:GGTCTC(1/5) 5'GGTCTC(N)₁↓3' 和 3'CCAGAG(N)₅↑5'。GMP Grade的BsaI酶源自重组大肠杆菌,能够在15分钟到1小时内精确地完成目标DNA的酶切。
尊龙凯时的产品生产及质量管理体系完全符合GMP规范,确保生产过程及原辅料的全程可追溯。整个生产过程中不使用抗生素及任何动物来源的材料,以及对宿主蛋白、外源DNA、非特异性内切酶、DNase和RNase等相关杂质进行严格控制。此外,还会对微生物限度和细菌内毒素进行严格审核,以符合疫苗与药物生产领域的高标准要求。
最后,失活条件为80℃孵育20分钟。对于经过CpG甲基化的DNA,其剪切可能受到阻碍,而对于Dcm甲基化的DNA,剪切同样可能遭遇障碍。
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